<span id="elfte"></span>
  • <optgroup id="elfte"><li id="elfte"></li></optgroup>

      1. <optgroup id="elfte"><li id="elfte"><del id="elfte"></del></li></optgroup>

        <ol id="elfte"><blockquote id="elfte"></blockquote></ol>

              GB 5009.83-2016 食品安全國家標準 食品中胡蘿卜素的測定

              更新時間:2023-11-08      點擊次數:161

              GB 5009.83-2016 食品安全國家標準 食品中胡蘿卜素的測定.jpg

              中華人民共和國國家標準

              GB 5009.83-2016

              食品安全國家標準 食品中胡蘿卜素的測定

               

                本標準代替GB 5413.35-2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中β-胡蘿卜素的測定》、GB/T 5009.83-2003《食品中胡蘿卜素的測定》和NY/T 82.15-1988《果汁測定方法 β-胡蘿卜素的測定》。

                本標準與GB5413.352010相比,主要變化如下:

                ——標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中胡蘿卜素的測定";

                ——增加了普通食品的前處理方法;

                ——增加了需要區分α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素的色譜條件;

                ——修改了胡蘿卜素的結果表達。

               

              1 范圍

                本標準規定了食品中胡蘿卜素的測定方法。

                本標準色譜條件一適用于食品中α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素及總胡蘿卜素的測定,色譜條件二適用于食品中β-胡蘿卜素的測定。

               

              2 原理

                試樣經皂化使胡蘿卜素釋放為游離態,用石油醚萃取二氯甲烷定容后,采用反相色譜法分離,外標法定量。

               

              3 試劑和材料

                除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的一級水。

              3.1 試劑

              3.1.1 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。

              3.1.2 木瓜蛋白酶:酶活力≥5U/mg。

              3.1.3 氫氧化鉀(KOH)。

              3.1.4 無水硫酸鈉(Na2SO4)。

              3.1.5 抗壞血酸(C6H8O6)。

              3.1.6 石油醚:沸程30~60℃。

              3.1.7 甲醇(CH4O):色譜純。

              3.1.8 乙腈(C2H3N):色譜純。

              3.1.9 三氯甲烷(CHCl3):色譜純。

              3.1.10 甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]:色譜純。

              3.1.11 二氯甲烷(CH2Cl2):色譜純。

              3.1.12 無水乙醇(C2H6O):優級純。

              3.1.13 正己烷(C6H14):色譜純。

              3.1.14 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C15H24O,BHT)。

              3.2 試劑配制

                氫氧化鉀溶液:稱固體氫氧化鉀500g,加入500mL水溶解。臨用前配制。

              3.3 標準品

              3.3.1 α-胡蘿卜素(C40H56,CAS號:7488-99-5):純度≥95%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。

              3.3.2 β-胡蘿卜素(C40H56,CAS號:7235-40-7):純度≥95%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。

              3.4 標準溶液配制

              3.4.1 α-胡蘿卜素標準儲備液(500μg/mL):準確稱取α-胡蘿卜素標準品50mg(精確到0.1mg),加入0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,轉移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光儲存,使用期限不超過3個月。標準儲備液用前需進行標定,具體操作見附錄A。

              3.4.2 α-胡蘿卜素標準中間液(100μg/mL):由α-胡蘿卜素標準儲備液中準確移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。

              3.4.3 β-胡蘿卜素標準儲備液(500μg/mL):準確稱取β-胡蘿卜素標準品50mg(精確到0.1mg),加入0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,轉移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光儲存,使用期限不超過3個月。標準儲備液用前需進行標定,具體操作見附錄A。

                注:β-胡蘿卜素標準品主要為全反式(all-E)β-胡蘿卜素,在儲存過程中受到溫度、氧化等因素的影響,會出現部分全反式β-胡蘿卜素異構化為順式β-胡蘿卜素的現象,如9-順式(9Z)-β-胡蘿卜素、13-順式(13Z)-β-胡蘿卜素、15-順式(15Z)-β-胡蘿卜素等。如果采用色譜條件一進行β-胡蘿卜素的測定,應按照附錄B確認β-胡蘿卜素異構體保留時間,并計算全反式β-胡蘿卜素標準溶液色譜純度。

              3.4.4 β-胡蘿卜素標準中間液(100μg/mL):從β-胡蘿卜素標準儲備液中準確移取10.0mL 溶液于50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。

              3.4.5 α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素混合標準工作液(色譜條件一用):準確移取α-胡蘿卜素標準中間液0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6100mL棕色容量瓶,分別加入3.00mLβ-胡蘿卜素中間液,用二氯甲烷定容至刻度,得到α-胡蘿卜素濃度分別為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10.00μg/mL,β-胡蘿卜素濃度均為3.0μg/mL的系列混合標準工作液。

              3.4.6 β-胡蘿卜素標準工作液(色譜條件二用):從β-胡蘿卜素標準中間液中分別準確移取0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6100mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至刻度,得到濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL的系列標準工作液。

               

              4 儀器和設備

              4.1 勻漿機。

              4.2 高速粉碎機。

              4.3 恒溫振蕩水浴箱:控溫精度±1℃。

              4.4 旋轉蒸發器。

              4.5 氮吹儀。

              4.6 紫外-可見光分光光度計。

              4.7 高效液相色譜儀(HPLC):帶紫外檢測器。

               

              5 分析步驟

                注:整個實驗操作過程應注意避光。

              5.1 試樣制備

                谷物、豆類、堅果等試樣需粉碎、研磨、過篩(篩板孔徑0.3mm~0.5mm);蔬菜、水果、蛋、藻類等試樣用勻質器混勻;固體粉末狀試樣和液體試樣用前振搖或攪拌混勻。4℃冰箱可保存1周。

              5.2 試樣處理

              5.2.1 普通食品試樣

              5.2.1.1 預處理

                蔬菜、水果、菌藻類、谷物、豆類、蛋類等普通食品試樣準確稱取混合均勻的試樣1g~5g(精確至0.001g),油類準確稱取0.2g~2g(精確至0.001g),轉至250mL錐形瓶中,加入1g抗壞血酸、75mL無水乙醇,于60℃±1℃水浴振蕩30min。

                如果試樣中蛋白質、淀粉含量較高(>10%),先加入1g抗壞血酸、15mL45~50℃溫水、0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶,蓋上瓶塞混勻后,置55 ℃±1 ℃恒溫水浴箱內振蕩或超聲處理30min后,再加入75mL無水乙醇,于60℃±1℃水浴振蕩30min。

              5.2.1.2 皂化

                加入25mL氫氧化鉀溶液,蓋上瓶塞。置于已預熱至53℃±2℃恒溫振蕩水浴箱中,皂化30min。取出,靜置,冷卻到室溫。

              5.2.2 添加β-胡蘿卜素的食品試樣

              5.2.2.1 預處理

                固體試樣:準確稱取1g~5g(精確至0.001g),置于250mL 錐形瓶中,加入1g抗壞血酸,加50mL45~50℃溫水混勻。加入0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶(無淀粉試樣可以不加α-淀粉酶),蓋上瓶塞,置55℃±1℃恒溫水浴箱內振蕩或超聲處理30min。

              液體試樣:準確稱取5g~10g(精確至0.001g),置于250mL錐形瓶中,加入1g抗壞血酸。

              5.2.2.2 皂化

                取預處理后試樣,加入75mL無水乙醇,搖勻,再加入25mL氫氧化鉀溶液,蓋上瓶塞。置于已預熱至53℃±2℃恒溫振蕩水浴箱中,皂化30min。取出,靜置,冷卻到室溫。

              注:如皂化不完全可適當延長皂化時間至1h。

              5.3 試樣萃取

                將皂化液轉入500mL分液漏斗中,加入100mL石油醚,輕輕搖動,排氣,蓋好瓶塞,室溫下振蕩10min后靜置分層,將水相轉入另一分液漏斗中按上述方法進行第二次提取。合并有機相,用水洗至近中性。棄水相,有機相通過無水硫酸鈉過濾脫水。濾液收入500 mL 蒸發瓶中,于旋轉蒸發器上40℃±2℃減壓濃縮,近干。用氮氣吹干,用移液管準確加入5.0mL二氯甲烷,蓋上瓶塞,充分溶解提取物。經0.45μm 膜過濾后,棄出初始約1mL濾液后收集至進樣瓶中,備用。

                注:必要時可根據待測樣液中胡蘿卜素含量水平進行濃縮或稀釋,使待測樣液中α-胡蘿卜素和/或β-胡蘿卜素濃度在0.5μg/mL~10μg/mL范圍內。

              5.4 色譜測定

              5.4.1 色譜條件一(適用于食品中α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素及總胡蘿卜素的測定)

              5.4.1.1 參考色譜條件

                參考色譜條件列出如下:

                a) 色譜柱:C30,柱長150mm,內徑4.6mm,粒徑5μm,或等效柱;

                b) 流動相:A 相:甲醇∶乙腈∶水=73.524.52;

                         B相:甲基叔丁基醚;

               image.png

                c) 流速:1.0mL/min;

                d) 檢測波長:450nm;

                e) 柱溫:30℃±1℃;

                f) 進樣體積:20μL。

              5.4.1.2 繪制α-胡蘿卜素標準曲線、計算全反式β-胡蘿卜素響應因子

                將α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素混合標準工作液注入HPLC儀中(色譜圖見圖C.1),根據保留時間定性,測定α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素各異構體峰面積。

                α-胡蘿卜素根據系列標準工作液濃度及峰面積,以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制標準曲線,計算回歸方程。

                β-胡蘿卜素根據標準工作液標定濃度、全反式β-胡蘿卜素6次測定峰面積平均值、全反式β-胡蘿卜素色譜純度(CP ,計算方法見附錄B),按式(1)計算全反式β-胡蘿卜素響應因子。

              image.png

              式中:

                RF——全反式β-胡蘿卜素響應因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg);

                `Aall-E——全反式β-胡蘿卜素標準工作液色譜峰峰面積平均值,單位為峰面積(AU);

                ρ——β-胡蘿卜素標準工作液標定濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

                CP——全反式β-胡蘿卜素的色譜純度,%。

              5.4.1.3 試樣測定

                在相同色譜條件下,將待測液注入液相色譜儀中,以保留時間定性,根據峰面積采用外標法定量。α-胡蘿卜素根據標準曲線回歸方程計算待測液中α-胡蘿卜素濃度,β-胡蘿卜素根據全反式β-胡蘿卜素響應因子進行計算。

              5.4.2 色譜條件二(適用食品中β-胡蘿卜素的測定)

              5.4.2.1 參考色譜條件

                參考色譜條件列出如下:

              a) 色譜柱:C18柱,柱長250mm,內徑4.6mm,粒徑5μm,或等效柱;

              b) 流動相:三氯甲烷∶乙腈∶甲醇=31285,含抗壞血酸0.4g/L,經0.45μm 膜過濾后備用;

              c) 流速:2.0mL/min;

              d) 檢測波長:450nm;

              e) 柱溫:35℃±1℃;

              f) 進樣體積:20μL。

              5.4.2.2 標準曲線的制作

                將β-胡蘿卜素標準工作液注入HPLC儀中(色譜圖見圖C.2),以保留時間定性,測定峰面積。以標準系列工作液濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制標準曲線,計算回歸方程。

              5.4.2.3 試樣測定

                在相同色譜條件下,將待測試樣液分別注入液相色譜儀中,進行HPLC分析,以保留時間定性,根據峰面積外標法定量,根據標準曲線回歸方程計算待測液中β-胡蘿卜素的濃度。

                注:本色譜條件適用于α-胡蘿卜素含量較低(小于總胡蘿卜素10%)的食品試樣中β-胡蘿卜素的測定。

               

              6 分析結果的表述

              6.1 色譜條件一

                試樣中α-胡蘿卜素含量按式(2)計算:

              image.png

                式中:

                Xα——試樣中α-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

                ρα——從標準曲線得到的待測液中α-胡蘿卜素濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

                V——試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

                100——將結果表示為微克每百克(μg/100g)的系數;

                m——試樣質量,單位為克(g)。

                試樣中β-胡蘿卜素含量按式(3)計算:

              image.png

                式中:

                Xβ——試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

                Aall-E——試樣待測液中全反式β-胡蘿卜素峰面積,單位為峰面積(AU);

                A9Z——試樣待測液中9-順式-β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(AU);

                A13Z——試樣待測液中13-順式-β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(AU);

                1.2——13-順式-β-胡蘿卜素的相對校正因子;

                A15Z——試樣待測液中15-順式-β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(AU);

                1.4——15-順式-β-胡蘿卜素的相對校正因子;

                AxZ——試樣待測液中其他順式β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(AU);

                V——試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

                100——將結果表示為微克每百克(μg/100g)的系數;

                RF——全反式β-胡蘿卜素響應因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg);

                m——試樣質量,單位為克(g)。

                1:由于β-胡蘿卜素各異構體百分吸光系數不同(見附錄D),所以在β-胡蘿卜素計算過程中,需采用相對校正因子對結果進行校正。

                2:如果試樣中其他順式β-胡蘿卜素含量較低,可不進行計算。

                試樣中總胡蘿卜素含量按式(4)計算:

              image.png

                式中:

                X ——試樣中總胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

                Xα——試樣中α-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

                Xβ——試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g)。

                注:必要時,α-胡蘿卜素,β-胡蘿卜素可轉化為微克視黃醇當量(μgRE)進行表示。

                計算結果保留三位有效數字。

              6.2 色譜條件二

                試樣中β-胡蘿卜素含量按式(5)計算:

              image.png    

              式中:

                Xβ——試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

                ρβ——從標準曲線得到的待測液中β-胡蘿卜素濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

                V——試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

                100——將結果表示為微克每百克(μg/100g)的系數;

                m——試樣質量,單位為克(g)。

                注:結果中包含全反式β-胡蘿卜素、9-順式-β-胡蘿卜素、13-順式-β-胡蘿卜素、15-順式-β-胡蘿卜素、其他順式異構體;不排除可能有部分α-胡蘿卜素。

                計算結果保留三位有效數字。

               

              7 精密度

                在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

               

              8 其他

                試樣稱樣量為5g時,α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素檢出限均為0.5μg/100g,定量限均為1.5μg/100g。


              版權所有©2024 廣州信譜徠科學儀器有限公司 All Rights Reserved    備案號:粵ICP備13051513號    sitemap.xml    管理登陸    技術支持:化工儀器網    
              久久成人做爰电影AV_香蕉久久精品日日躁夜夜躁_欧美狂野乱码一二三四区_色噜噜综合熟女人妻一区